MÉTODOS

La tecnología se basa en la extensión de oligos alelo-específicos y FRET (transmisión de energía de resonancia por fluorescencia) (Semagn, 2013), el ensayo KASP requiere de dos cebadores directos alelo-específicos (un cebador para cada SNP de cada alelo), otro cebador reverso común para ambos alelos y dos oligos, uno marcado con el fluoroforo FAM y otro con HEX, cada oligo es complementario a la secuencia terminal de cada uno de los cebadores de los alelos a evaluar, al iniciar la reacción los oligos fluorescentes están hibridados con desactivadores de fluorescencia. (He, 2014; Robinson, 2011; Majeed, 2018).

En el transcurso de la PCR, el cebador del alelo de interés se une a la hebra molde de ADN y se elonga fijando también la secuencia del extremo terminal donde se hibridará el fluoroforo correspondiente a ese alelo, tras varios ciclos de PCR el fluoroforo pierde su desactivador, se une al cebador directo y emite una señal fluorescente medible. KASP logra discriminar bialelos mediante la unión competitiva de los cebadores directos alelo-específicos, si el genotipo es homocigoto solamente se emitirá una señal fluorescente, si el genotipo es heterocigoto la señal será mixta. (Robinson, 2011).